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禽蛋中三聚氰胺的测定——四川省地方标准 DB51/T861—2008




来源:四川畜牧食品信息网 日期:2009-05-12 作者:
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禽蛋中三聚氰胺的测定

Determination of melamine in eggs

 

 

2008-12-26发布                               2009-01-01实施

四川省质量技术监督局  发布

 

 

 目    次

前言

1 范围

2 规范性引用文件

3 方法1:高效液相色谱法

4 方法2:气相色谱质谱法

附录A (资料性附录)

 

前    言

本标准的附录A为资料性附录。

本标准按GB/T.1.1-2000《标准的结构和编写规则》和GB/T.1.2-2002《标准中规范性技术要素内容的确定方法》要求进行编制。

本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准由四川省畜产品安全检测中心负责起草。

本标准起草人:廖峰﹑赵立军﹑李云﹑高庆军﹑林顺全﹑张静。

 

禽蛋中三聚氰胺的测定

1 范围

本标准规定了测定禽蛋中三聚氰胺的含量的高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱质谱联用法(GC-MS),其中GC-MS法为确证法。

本标准适用于禽蛋中三聚氰胺的测定。

本标准中HPLC法最低定量限为2.0 mg/kg,GC-MS法最低定量限为0.05 mg/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。

GB/T6682  分析实验室用水规格和试验方法

3 方法1:高效液相色谱法

3.1 原理

取适量禽蛋,将蛋清和蛋黄搅拌匀浆后用三氯乙酸和醋酸铅溶液提取,提取液离心后经混合型阳离子交换固相萃取柱净化,洗脱物吹干后用甲醇溶液溶解,用高效液相色谱仪进行测定。

3.2 试剂与材料

除非另有规定,仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682的三级水,色谱用水符合GB/T6682一级水的规定。

3.2.1 甲醇:色谱纯。

3.2.2 乙腈:色谱纯。

3.2.3 氨水:浓度25%~28%。

3.2.4 混合型阳离子交换固相萃取柱:60mg,3mL。

3.2.5 三氯乙酸溶液10g/L:称取10g三氯乙酸加水至1000mL。

3.2.6 氨水甲醇溶液:量取5mL氨水,溶解于95mL甲醇中。

3.2.7 乙酸铅溶液22g/L:取22g乙酸铅用约300mL水溶解后定容至1L。

3.2.8 滤膜:0.45μm,有机相。

3.2.9 甲醇溶液:200mL甲醇(3.2.1)加入800mL一级水,混匀。

3.2.10 流动相:称取2.16g辛烷磺酸钠和2.10g柠檬酸于1L容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度。取该溶液900mL加入100mL乙腈(3.2.2)。

3.2.11 三聚氰胺标准品(纯度>99%)。

3.2.12 三聚氰胺标准溶液

3.2.12.1 标准储备液:称取100mg(精确到0.1mg)的三聚氰胺标准品,用甲醇溶液(3.2.9)溶解并定容于100mL容量瓶中,该溶液浓度为1mg/mL,于4℃冰箱内贮存,有效期3个月。

3.2.12.2 标准中间液:吸取标准储备液5.00mL,于50mL容量瓶内,用甲醇溶液(3.2.9)定容至50mL,该溶液三聚氰胺浓度为100μg/mL,于4℃冰箱内贮存,有效期1个月。

3.2.12.3 标准工作液:用移液管分别移取标准中间液2mL、5mL、10mL、15mL、20mL于5个100mL容量瓶内,用甲醇溶液(3.2.9)定容,该溶液三聚氰胺浓度为2.0μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL。于4℃冰箱内贮存,有效期1周。

3.3 仪器与设备

3.3.1 高效液相色谱仪,配有二极管阵列检测器或紫外检测器。

3.3.2 离心机:10000r/min。

3.3.3 涡旋混合器。

3.3.4 超声波清洗器。

3.3.5 氮吹仪,可控温至60℃。

3.3.6 固相萃取装置。

3.3.7 高速匀质器。

3.3.8 震荡摇床。

3.3.9 带盖塑料离心管:50mL。

3.4 试料的制备

——取匀浆后的供试样品,作为供试材料;

——取匀浆后的空白样品,作为空白材料;

——取匀浆后的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。

3.5 测定步骤

3.5.1 提取

称取5.00g试样(精确至0.01g) 于带盖塑料离心管(3.3.9)中,准确加入28mL三氯乙酸溶液(3.2.5),加入2mL乙酸铅溶液(3.2.7)。摇匀,超声提取20min。在10000r/min离心机上离心10min,上清液备用。

3.5.2 净化

分别用3mL甲醇,3mL水活化混合型阳离子交换固相萃取柱,准确移取6mL离心液分次上柱,控制过柱速度在1mL/min以内。再用3mL水和3mL甲醇洗涤混合型阳离子交换固相萃取柱,抽近干后用氨水甲醇溶液(3.2.6)5mL洗脱。洗脱液50℃氮气吹干,准确加入1.00mL甲醇溶液(3.2.9),涡旋振荡1min,过0.45μm滤膜,上机测定。

3.5.3 液相色谱条件

色谱柱:C18柱,柱长150mm,内径4.6mm,粒度5μm;或性能相当的色谱柱。

柱温:室温。

流动相流速:1.0mL/min。

检测波长:240nm。

3.5.4 测定

按照保留时间进行定性,试样与标准品保留时间的相对偏差不大于2%,单点或多点校正外标法定量。待测样液中三聚氰胺的响应值应在工作曲线范围内。

3.6 结果计算和表述

3.6.1 试样中三聚氰胺的含量X,以质量分数毫克每千克(mg/kg)表示,单点校正按式(1)计算:

…………………………………………………(1)

式中:

V——净化后加入的甲醇溶液体积,单位为毫升(mL);

As——三聚氰胺标准溶液对应的色谱峰面积响应值;

A——试样溶液对应的色谱峰面积响应值;

Cs——三聚氰胺标准溶液的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);

m——试样质量,单位为克(g);

n——稀释倍数。

多点校正按式(2)计算:

…………………………………………………(2)

式中:

V——净化后加入的甲醇溶液体积,单位为毫升(mL);

Cx——标准曲线上查得的试样中三聚氰胺的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);

m——试样质量,单位为克(g);

n——稀释倍数。

3.6.2 结果表示

平行测定结果用算术平均值表示,结果保留三位有效数字。

3.7 重复性

在同一实验室由同一操作人员使用同一仪器完成的两个平行测定的相对偏差不大于10%。

4 方法2:气相色谱质谱法

4.1 方法原理

试样中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取,经混合型阳离子交换固相萃取柱净化,用N,O—双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化,以气相色谱质谱联用仪进行定性和定量。

4.2 试剂和材料

4.2.1 衍生化试剂:BSTFA+1%三甲基氯硅烷(TMCS)。

4.2.2 吡啶:优级纯。

4.2.3 其他试剂和材料同3.2.1~3.2.8、3.2.11、3.2.12。

4.2.4 标准工作液:用移液管分别吸取标准中间液(3.2.12.2)适量,用甲醇稀释至三聚氰胺的浓度分别为0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL的标准工作液。

4.3 仪器和设备

4.3.1 气相色谱质谱联用仪。

4.3.2 其他同3.3.2~3.3.9。

4.4 分析步骤

4.4.1 前处理同3.5.1~3.5.2,但需根据洗脱液中三聚氰胺的浓度用甲醇进行适当稀释。

4.4.2 衍生化

取4.4.1的稀释液适量用氮气吹于,加入200μL的吡啶和200μL的衍生化试剂(4.2.1),混匀,70℃反应30min。同时,用三聚氰胺标准系列(4.2.4)或相应浓度单点标准做同步衍生。

4.4.3 测定

4.4.3.1 GC-MS条件

色谱柱:柱长30m,内径0.25mm,甲基苯基聚硅氧烷涂层,膜厚0.25μm。

载气:氦气,流速为1.3mL/min。

进样量:1μL。

进样口温度:250℃;

升温程序:起始温度75℃,持续1.0min,以30℃/min升温至300℃,保持2.0min。

传输线温度:280℃。

运行时间:10.5min。

扫描范围:60m/z~400m/z。

扫描模式:选择离子扫描。监测离子99m/z、171m/z、327m/z、342m/z。

离子源温度:230℃。

EI源轰击能:70eV。

4.4.3.2 测定

定性方法:试样与标准品保留时间的相对偏差不大于0.5%,特征离子丰度与标准品相差不大于20%。

定量方法:以342、327、171和99峰面积之和进行单点或多点校正定量。

4.5 结果计算和表述

4.5.1 试样中三聚氰胺的含量X,以质量分数毫克每千克(mg/kg)表示,单点校正按式(3)计算:

…………………………………………………(3)

式中:

A——试样溶液对应的色谱峰面积响应值;

As——三聚氰胺标准溶液对应的色谱峰面积响应值;

Cs——标准工作液中三聚氰胺的浓度,单位为微克每毫升(μ/mL);

V——用于衍生的试样溶液(4.4.2)体积,单位为毫升(mL);

m——试样质量,单位为克(g);

n——稀释倍数。

多点校准时,可用公式(4):

…………………………………………………(4)

式中:

V——用于衍生的试样溶液(4.4.2)体积,单位为毫升(mL);

Cx——由标准曲线而得的样液中三聚氰胺的含量,单位为微克每毫升(μg/mL);

m——试样量,单位为克(g);

n——稀释倍数。

4.5.2 平行测定结果用算术平均值表示,结果保留三位有效数字。

4.6 重复性

在同一实验室由同一操作人员使用同一仪器完成的两个平行测定的相对偏差不大于20%。

 

 

附 录 A

(资料性附录)

A.1 三聚氰胺标准色谱图(点击放大)

A.2 三聚氰胺紫外光谱图(点击放大)

A.3 三聚氰胺标准品衍生物选择离子色谱图(点击放大)

A.4 三聚氰胺标准品衍生物选择离子质谱图(点击放大)