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链球菌的检验




来源:重庆市动物疫病预防控制中心 日期:2010-07-08 作者:

      引起临床型乳房炎或者亚临床型乳房炎的链球菌常见的有无乳链球菌、停乳链球菌以及乳房链球菌。 

      1主要试剂和试验方法 

      CAMP试验:在血琼脂平板上用金黄色葡萄球菌培养物划一条直线,然后将链球菌培养物划一条线,与金黄色葡萄球菌培养物的划线相互垂直,但不要接触,二者相距3-5mm,各链球菌分离菌划线间距l0~20mm。置37℃温箱内培养24h后观察结果。在两划线交界处出现箭头样的溶血区为阳性。 

      2乳样的采集 

      选取出现临床症状(或者怀疑为亚临床型乳房炎)乳房炎奶牛,先用温水,再用0.2%新洁尔灭擦洗乳房,最后用70%的酒精擦拭乳头。采样者同时进行手指擦拭消毒。每个乳室先挤去头2~3把奶,以排除污染的杂菌,每头奶牛取乳样5mL于无菌乳样杯中,待检。 

      3病原菌的分离培养 

      初步诊断:将少量乳汁涂片、革兰氏染色、镜检。如发现圆球形革兰氏阳性细菌可怀疑为链球菌。 

      分离培养:将乳样摇匀,分别取适量接种于营养肉汤(10%血清)、鲜血琼脂、麦康凯琼脂培养基(平板)后,置于37℃温箱培养24~48h。观察每个平板中细菌生长的情况,记录菌落生长表现。 

      普通琼脂平板上,37℃,24~72h培养后,未见到菌落。 

      鲜血琼脂平板上长有灰白色、半透明表面光滑圆形隆起的小菌落,出现溶血现象,如果是β溶血则疑为无乳链球菌,如果为α溶血,疑为停乳链球菌或者乳房链球菌,如为γ溶血,则疑为乳房链球菌。 

      血清肉汤中生长初呈均匀浑浊,管底出现絮状沉淀,上清变得透明。 

      挑取典型菌落涂片、染色、镜检,镜检如呈球状,短链状或者长链状排列,无芽胞、荚膜,革兰氏染色阳性则疑为链球菌。 

      4生化鉴定 

      镜检形态符合链球菌特性,且触酶试验阴性细菌,即鉴定为链球菌属细菌。若细菌CAMP试验阳性,不水解七叶苷和马尿酸钠,即鉴定为无乳链球菌;若细菌CAMP试验阴性,不水解七叶苷和马尿酸钠,即鉴定为停乳链球菌;若细菌CAMP试验阴性,水解七叶苷和马尿酸钠,即鉴定为乳房链球菌。 

      5动物试验 

      对实验动物,只有停乳链球菌具有致病性,将其18h血清肉汤培养物0.5mL注入小白鼠腹腔,或给家兔静脉接种l~2mL,可使动物在1周内死亡。对接种后发病、死亡小鼠(家兔)的肝脏进行病原菌重分离。进行菌落涂片、革兰氏染色、显微镜检查,观察所分离菌株是否为原接种菌。如果是则进一步确定病原菌为停乳链球菌。其他两种链球菌并不能使试验动物致死。